二乙酰一肟安替比林光度法

㈠方法簡介

二乙酰一肟 [CH₃C(=NOH)COCH₃]，別名：2,3-丁二酮一肟，聯(lián)乙酰一肟，雙乙酰一肟，甲基肟乙基甲酮，丁二酮單肟，2,3-丁二酮肟]與尿素及安替比林反應(yīng)呈現(xiàn)黃色,在波長460 nm處有最大吸收峰, 校準(zhǔn)曲線在0~14 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。該法是國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)檢驗(yàn)方法。

在水浴顯色反應(yīng)過程中，加入少量的硫酸鉀溶液與硫酸反應(yīng)生成硫酸氫鉀可以提高反應(yīng)的溫度(純硫酸沸點(diǎn)330℃，添加硫酸鉀后溫度可達(dá)400℃)，加速其反應(yīng)。加入30 g/LK₂SO₄溶液2.0 mL，保持水浴沸水劇烈沸騰35 min就能使顯色更完全、更穩(wěn)定。

㈡儀器

⑴ 分光光度計。

⑵ 棕色具塞比色管：25 mL。

⑶ 比色皿：1 cm。

⑷ 微量進(jìn)樣器：50 μL、100 μL。

⑸ 水浴鍋。

㈢ 試劑

⑴ 二乙酰一肟溶液:2 g/L，稱取0.2 g二乙酰一肟[CH₃C(=NOH)COCH₃，別名：2,3-丁二酮一肟，聯(lián)乙酰一肟，雙乙酰一肟，甲基肟乙基甲酮，丁二酮單肟，2,3-丁二酮肟],溶于10 % 乙酸中，并稀釋至100 mL保存于棕色瓶中備用。

⑵ 安替比林溶液：2 g/L，稱取0.2 g安替比林[ C₆H₅NN(CH₃)C(CH₃)CHCO，1, 5-二甲基-2-苯-3-吡唑酮,]溶于100 mL（1+1）硫酸中，保存于棕色瓶中。

⑶ 硫酸鉀溶液：30 g/L，稱取分析純硫酸鉀3.0 g加純水稀釋至100 mL。

⑷ 尿素標(biāo)準(zhǔn)使用溶液：4.0 μg/mL，準(zhǔn)確稱取0.1000 g尿素于小燒杯中，加少量純水溶解后轉(zhuǎn)入1000 mL容量瓶中，加0.1 mL三氯甲烷并用純水定容，再從中吸取4.00 mL于100 mL容量瓶中，用純水定容后待用。

㈣校準(zhǔn)曲線的制作

⑴ 在25 mL棕色具塞比色管中，加入4.0 μg/mL的尿素標(biāo)準(zhǔn)使用液的體積(mL)分別為：0、0.50、1.00、2.00、3.00、3.50 加純水至10 mL。

    ⑵ 向比色管中，各加入二乙酰一肟溶液1.0 mL。混勻后再加入安替比林溶液2.0 mL，混勻。放置3 min后，加入硫酸鉀溶液2.0 mL，用純水稀釋至25 mL。

    ⑶ 將上述各管置于沸水浴鍋中,沸水水面高度以能高于具塞比色管內(nèi)液面高度為標(biāo)準(zhǔn),保持沸水一直處于劇烈沸騰狀態(tài)。以放入具塞比色管后沸水溫度達(dá)到要求開始記時，煮沸35 min，取出具塞比色管，流水沖洗冷卻2 min。用純水將各比色管補(bǔ)充至刻度后搖勻。

    ⑷ 在460 nm處,以純水為對照,用1 cm比色皿,測定各管吸光度值。

⑸ 以尿素的質(zhì)量值[m_尿素/μg ]為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)，繪制校準(zhǔn)曲線，如 圖9-12。

㈤測定步驟 

⑴ 取三價鉻鍍液1 mL(V₁/mL)于500 mL容量瓶(V_α/mL)中，用水稀至刻度，搖勻。

⑵ 從500 mL容量瓶中吸取稀釋后的鍍液1 mL(V₂/mL)于50 mL容量瓶(V_b/mL)中，用水稀至刻度，搖勻。

⑶從50 mL容量瓶中吸取稀釋后的鍍液1 ~5 mL(V₃/mL,使m_尿素 ≯14 μg )兩份 ，分置于兩支25 mL棕色具塞比色管中。

⑷將兩支比色管中的一支直接用水定容至刻度搖勻（用作參比溶液）。